第四节　性病实验室检查

一、淋球菌检查

（一）适应证

临床可疑淋球菌感染者。

（二）禁忌证

无特殊禁忌。

（三）步骤

1.标本采集

用含无菌生理盐水的藻酸钙棉拭子，伸入男性尿道2～4cm，轻轻转动取出分泌物；女性先用无菌脱脂棉擦去阴道内黏液，再用藻酸钙棉拭子插入宫颈内1～2cm处旋转取出分泌物；患结膜炎的新生儿取结膜分泌物；全身性淋病时可取关节液或关节穿刺液；前列腺炎患者经按摩取前列腺液。

2.直接涂片

主要用于急性感染患者。涂片2张，自然干燥，加热固定后做革兰氏染色，油镜下检查。

3.细菌培养

标本立即接种于血琼脂或巧克力琼脂平板上，置于含5%～10%的二氧化碳孵箱，37℃孵育24～48小时后观察结果。挑选可疑菌落做涂片染色镜检。可用氧化酶试验或糖发酵试验进一步证实。

4.结果

涂片染色镜检可见大量多形核白细胞，细胞内外可找到成双排列、呈肾形的革兰氏阴性双球菌。在血平皿上可形成圆形、稍凸、湿润、光滑、透明至灰白色的菌落，直径为0.5～1.0mm。生化反应符合淋球菌特性。

（四）注意事项

1.取材时拭子伸入尿道或宫颈口内的深度要足够。

2.尿道取材前2小时内不应排尿。

3.涂片时动作宜轻柔，防止细胞破裂变形，涂片的厚薄与固定及革兰氏染色时间要合适。

二、衣原体检查

（一）适应证

临床可疑沙眼衣原体所致的泌尿生殖道感染和直肠炎。

（二）禁忌证

无特殊禁忌。

（三）步骤

1.标本采集

男性将拭子插入尿道2～4cm，旋转3～5秒后取出。女性先用无菌脱脂棉擦去阴道内黏液，再将取样拭子插入宫颈管内通过鳞柱状上皮交界处，直到几乎拭子头已看不到，旋转拭子15～20秒取出，不要碰到宫颈外及阴道壁。上述取材方法主要用于保证得到更多的柱状上皮细胞。

2.直接涂片

标本涂片后自然干燥，甲醇固定5～10分钟后，用当日配制的吉姆萨溶液染色1小时，再用95%乙醇淋洗、干燥，油镜下阳性标本可在上皮细胞质内找到1～3个或更多个呈蓝色、深蓝色或暗紫色的包涵体，碘染色呈棕褐色。阳性者结合临床可初步诊断。

3.细胞培养法

将每份标本接种于3个培养瓶（为McCoy单层细胞管）中，置37℃吸附2小时后，用维持液洗涤2～3次，最后加生长液，37℃培养3～4日，取出盖玻片，经吉姆萨染色或直接荧光染色后镜检，查包涵体。阳性标本碘染色包涵体呈棕黑色，吉姆萨染色呈红色。有相应症状，再加上衣原体分离培养阳性者，可确诊。

4.衣原体抗原检测法（clearview chlamydia，简称“C-C快速法”）

用商品试剂盒检测方便、简单、快速，但稳定性略差。按说明书操作，质控窗和结果窗均显示一条蓝带为阳性结果，阴性为结果窗无变化。阳性结果结合临床可确定沙眼衣原体感染，阴性时不能完全排除，可用细胞培养法确定。

5.免疫荧光法

将标本涂于玻片凹孔或圆圈中，干燥处理后加荧光素标记的抗沙眼衣原体单克隆抗体试剂，待反应、封固后置显微镜下检查。阳性标本在高倍镜下可见上皮细胞内的原体颗粒，为单一、针尖大小、明亮的绿色荧光，在油镜下为荧光均匀、边缘光滑的圆盘样结构，也可见网状体等其他形态的衣原体颗粒。

6.聚合酶链式反应（PCR）及荧光标记探针法

适用于男性尿道标本、女性尿道和宫颈分泌物样本。用于检测疑似沙眼衣原体尿道炎、前列腺炎、附睾炎、直肠炎、不孕不育宫颈炎、输卵管炎、异位妊娠、早产等。标本处理严格按照商品试剂盒说明书操作，同时设定阳性质控对照和阴性质控对照。对试验条件要求苛刻，须在有资质的实验室进行。其特异性和敏感性显著高于上述其他方法。

（四）注意事项

同淋球菌检查。

三、支原体检查

（一）适应证

临床可疑支原体所致的泌尿生殖道感染。

（二）禁忌证

无特殊禁忌。

（三）步骤

1.标本采集

同衣原体检查。另外也可用10ml中段尿离心（2 000转/min，10分钟），取相应沉渣。

2.培养操作

接种于液体培养基，置5%～10%二氧化碳环境中，37℃培养24～72小时，每日观察颜色变化。24小时如由黄色变为酒红色，可能有解脲支原体生长；48小时变为酒红色，可能有人型支原体生长。取0.2ml培养物接种到固体培养基上，培养48小时后于低倍镜下观察，有典型“油煎蛋”状菌落者为阳性，可诊断支原体感染。

（四）注意事项

同淋球菌检查。

四、梅毒螺旋体检查

（一）适应证

临床可疑梅毒患者。

（二）禁忌证

无特殊禁忌。

（三）步骤

1.标本采集

采集血样或取病灶组织渗出物、淋巴结穿刺液、组织研磨液进行检查。

2.梅毒螺旋体直接检查

可采用暗视野显微镜检查，也可经镀银染色、吉姆萨染色或墨汁染色后用普通光学显微镜检查，或用直接免疫荧光技术检查。梅毒螺旋体菌体细长，两端尖直，在暗视野显微镜下折光性强，沿纵轴旋转伴轻度前后运动。镀银染色法示螺旋体呈棕黑色，吉姆萨染色法螺旋体呈桃红色，直接免疫荧光检查螺旋体呈绿色荧光。镜检阳性者结合临床症状和不洁性接触史可确诊。

3.快速血浆反应素环状卡片试验（rapid plasma reagin test，RPR）

①卡片定性试验：取50μl待检血清加入卡片的圆圈内，并涂均匀。以专用滴管加入摇匀的抗原一滴，将卡片旋转8分钟后立即观察结果。阳性，卡片圆圈中出现黑色凝聚颗粒和絮片。阴性，无凝聚块出现，仅见均匀的亮灰色。②卡片定量试验：用等量生理盐水在小试管内作6个稀释度，即1：1、1：2、1：4、1：8、1：16、1：32，每个稀释度取50μl血清加入玻片圆圈中，按定性法测定。与该法类似的方法还有TRUST（syphilis toluidine red untreated serum test）、VDRL试验（venereal disease research laboratory test）和USR试验，其中TRUST因其稳定性好、易于判断，正被更多的实验室采用。

4.梅毒螺旋体颗粒凝集试验（treponema pallidum particle agglutination test，TPPA）

将从感染家兔睾丸中提取的梅毒螺旋体纯化，并以超声粉碎后作为抗原，以明胶颗粒为载体进行检测。类似的方法尚有梅毒螺旋体血凝（treponema pallidum particle hemagglutination assay，TPHA）试验、荧光螺旋体抗体吸收试验（fluorescent treponemal antibody-absorption test，FTA-ABS）等。

（四）注意事项

1.RPR（或TRUST）敏感性高而特异性低。结果为阳性时，临床表现符合梅毒，可初步诊断。定量试验是疗效观察、判断复发及再感染的手段。假阴性常见于：一期梅毒硬下疳出现后的2～3周内、感染梅毒后立即治疗、晚期梅毒或二期梅毒的“前带现象”。对临床可疑梅毒但RPR为阴性的患者，有必要进一步进行血清稀释以排除“前带现象”。假阳性结果常见于自身免疫性疾病患者、麻风患者、海洛因成瘾者、少数孕妇及老人。

2.TPPA常呈持久阳性，不可用于疗效观察。

五、杜克雷嗜血分枝杆菌检查

（一）适应证

临床可疑软下疳。

（二）禁忌证

无特殊禁忌。

（三）步骤

1.标本采集

在开放的溃疡中不易查到细菌，所以最好从淋巴结取材，涂片一次推涂，以保持细菌特征性排列形态。穿刺宜从健康皮肤处进针，皮下潜行至损害处抽液，以免形成瘘管。

2.细菌涂片

革兰氏染色可见呈鱼群状排列的杜克雷嗜血分枝杆菌，阳性即可作出初步诊断。

3.细菌培养

用含有血清和低浓度万古霉素的选择培养基培养24～48小时，菌落直径1～2mm，色灰黄、凸起、粗糙并能在培养基上推动，通过菌落取材镜检并做生化反应，以确定诊断。

（四）注意事项

细菌涂片阳性即可作出初步诊断，但容易出现假阴性或假阳性，特异性和敏感性可能都低于50%，故不推荐将细菌涂片检查阳性作为诊断标准。

六、醋酸白试验

（一）适应证

临床可疑尖锐湿疣。

（二）禁忌证

无特殊禁忌。

（三）步骤

以棉签清除局部分泌物后，蘸5%冰醋酸液涂于受试皮损及周围正常皮肤黏膜，2～5分钟后皮损变为白色，周围正常组织不变色为阳性。

（四）注意事项

醋酸白试验的敏感性高，对确诊HPV感染特别是亚临床感染很有帮助。但其他原因引起的慢性炎症致上皮增厚时也可出现假阳性反应。假阳性反应发白区的界限常不清和不规则。

七、核酸扩增试验

（一）适应证

尖锐湿疣、鲍恩样丘疹病辅助诊断和宫颈癌风险评估。

（二）禁忌证

无特殊禁忌。

（三）步骤

标本处理严格按照商品试剂盒说明书操作，同时设定阳性质控对照和阴性质控对照。

（四）注意事项

扩增人乳头瘤病毒（HPV）特异性基因（L1、E6、E7区基因）。目前有多种核酸检测方法，包括荧光实时PCR、核酸探针杂交试验等。用于HPV基因分型检测，有良好的敏感性、特异性和可重复性。试验条件要求苛刻，每一轮反应体系均应设定阳性质控对照和阴性质控对照。正常人群脱落细胞有时也可以检测到HPV的部分基因型，诊断需结合临床。