第四节　特征多肽的验证

蛋白质的生物合成都起始于N端，其N端序列的组成对生物学功能有着巨大的影响，例如蛋白质的半衰期、蛋白质在亚细胞器中的定位等，而且N端可发生多种翻译后修饰，这些与蛋白质的功能和稳定性息息相关。因此，对于蛋白质N端序列的分析，有利于帮助分析蛋白质的高级结构，揭示蛋白质的生物学功能。并且随着现代医药工业的发展，出现了大量的蛋白质和多肽类药物分子，对这些蛋白质多肽类药物分子N端序列的分析确认也是医药工业质量控制的重要环节。目前对蛋白质N端序列分析的方法分为两大类：一是非质谱技术，例如经典的Edman降解法、RT-PCR反转录法；二是质谱技术。这两种方法都有其使用的长处和受制约之处，市面上采用基于经典的Edman降解法的N端序列分析方法较为普遍，利用蛋白质序列测序系统进行蛋白质N端序列分析。

Edman降解法是异硫氰酸苯酯（PITC）在弱碱（TMA）条件下与蛋白质N端α氨基偶联生成苯氨基硫甲酰肽（PTC-蛋白质），然后在无水强酸（TFA）条件下，N-端的第一个残基从完整的多肽蛋白链上以2-苯氨基噻唑啉酮（ATZ-AA）的形式裂解下来，之后在稀酸（25%TFA）条件下，ATZ-AA转化为更加稳定的苯基乙内酰硫N脲衍生物，即PTH-氨基酸（原理见图2-4-1），生成的PTH-AA输送至高效液相色谱中进行在线分析，剩下的多肽蛋白供试品可反复进行上述处理，依次生成各种PTH-AA，经液相系统分离可以确定被测多肽蛋白质供试品N端的氨基酸排列顺序。